发酵罐的使用方法
一、 发酵罐使用方法：
1、校正pH电极和溶氧电极。
2、罐体灭菌。根据需要将培养基配入罐体，按要求封好后，小型发酵罐（5L）可将罐体放入大灭菌锅灭菌（115℃，30分钟）；大中型发酵罐（10L及以上）采用蒸汽灭菌（121℃，30min）。
3、待罐体冷却后，将其置于发酵台上，安装完好；打开冷却水，打开气泵电源，连接通气管道开始通气，调节进气旋钮使通气量适当,使罐压保持在0.05MPa；设置温度、pH、搅拌速度等，并在确定的转速和通气量下对溶氧电极进行斜率标定，数值为100%
4、待温度稳定，各项参数都正确后，将预摇好的种子接入，开始发酵计时，并开始记录各种参数。
5、发酵完毕后清洗罐体和电极，将pH电极插入有3M氯化钾的三角瓶中待用，溶氧电极的探头用保护套套好，保存备用。
二、发酵罐维护保养
1、如进气管与出水管接头漏气，当旋紧接头不解决问题时，应添加或更换填料。
2、压力表与安全阀应定期检查，如有故障要及时调换或修理。
3、清洗发酵罐 时，请用软毛刷进行刷洗，不要用硬器刮擦，以免损伤发酵罐表面。
4、配套仪表应每年校验一次，以确保正常使用。
5、电器、仪表、传感器等电气设备严禁直接与水、汽接触，防止受潮。
6、设备停止使用时，应及时清洗干净，排尽发酵罐及各管道中的余水；松开发酵罐罐盖及手孔螺丝，防止密封圈产生永久变形。
7、操作平台、恒温水箱等碳钢设备应定期(一年一次)刷油漆，防止锈蚀。
8、经常检查减速器油位，如润滑油不够，需及时增加。
9、定期更换减速器润滑油，以延长其使用寿命。
10、如果发酵罐暂时不用，则需对发酵罐进行空消，并排尽罐内及各管道内的余水。
三、注意事项
1、 罐体灭菌前务必检查其中液面高度，要求所有的电极都没于液面以下。
2、打开发酵罐电源前务必检查冷却水是否已打开，温度探头是否已插入槽中，否则会烧坏加热电路。
3、发酵过程中一定要保持工作台的清洁，用过的培养瓶及其它物品及时清理，因故溅出的酸碱液或水应立即擦干。
4、 对罐体安装，拆卸和灭菌时要特别小心pH电极和罐体的易损又昂贵部件。
四、 pH电极长期不用如何保存？
1、电极较长时间不用时应按说明书要求保存在合适的液体中。
2、电极不能长期干放。干放的电极应先放在3MHCl（或饱和KCl）中活化后才能使用。
3、电极不可放在蒸馏水中保存。
五、溶氧电极长期不用如何保存？
1、探头较长时间不用时应将保护帽套好，放置在空气中保存。
六、 如何制备常用培养基
培养基制备（按1000ml计）
1、 营养肉汤（Nutrient broth）培养基：牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，加水至1000ml，pH7.2~7.4
2、 营养琼脂培养基(Nutrient agar)培养基: 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，琼脂15~20g,加水至1000ml，pH7.2~7.4
3、 肉汁葡萄糖培养基: 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，葡萄糖20g,琼脂15~20g,，pH7.2~7.4
4、 察氏培养基:NaNO32g,K2HPO4 1g,KCl 0.5g,MgSO4·7H2O 0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g,蔗糖30g, 琼脂15~20g,加水至1000ml，pH自然
5、 高氏一号培养基:可溶性淀粉20g,KNO31g,NaCl 0.5g, K2HPO4 0.5g, MgSO4·7H2O0.5g,FeSO4·7H2O 0.01g, 琼脂20g,加水至1000ml，pH7.2~7.4。此培养基适用于多数放线菌,孢子生长良好,宜保藏菌种。制法:先用少量冷水将淀粉调成糊状,再取700ml水盛于烧杯中,在电炉上加热,沸腾时边搅拌边将淀粉糊倒入,待透明后再将其他成分加入,最后补足水分至1000ml.
6、 无碳基础培养基(NH4)2SO4 5g,KH2PO4 1g,NaCl 0.1g, MgSO4·7H2O 0.5g,CaCl2 0.1g,酵母膏0.2g, 加蒸馏水至1000ml,pH6.5.加2%水洗琼脂即成固体培养基.于6.86×104Pa压力下灭菌20min.此培养基适用于测定酵母菌对碳源的利用(加待测碳源2%).
无氮基础培养基:葡萄糖20g, K2HPO4 1g, MgSO4·7H2O 0.5g,酵母膏 0.1g或20%豆芽汁20ml,水洗琼脂20g,加无氨蒸馏水至1000ml.pH6.5. 于6.86×104Pa压力下灭菌20min.此培养基适用于测定酵母菌对氮源的利用(加待测氮源0.5%).
8、 营养缺陷型筛选用培养基
⑴ 普通营养肉汤培养基
⑵ 加倍营养肉汤培养基: 牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，加水至500ml，pH7.2
⑶ Vogel 50×(即浓缩50倍): MgSO4·7H2O 10g,柠檬酸100g,NaNH4HPO4·4H2O175g,KH2PO4·2H2O599.88g,K2HPO4·3H2O656.31g,加蒸馏水至1000ml.配置时先加水500ml,加热使药品溶解后,再定容1000ml.配好后放入冰箱备用.
⑷ 固体基本培养基:Vogel 50×20ml,葡萄糖20g,水洗琼脂20g,加蒸馏水至1000ml,pH7.0,
⑸ 2氮液体基本培养基:K2HPO47g,KH2PO4 3g,柠檬酸纳·3H2O 5g,MgSO4·7H2O 0.1g,(NH4)2SO4 2g,葡萄糖20g,加蒸馏水至1000ml,pH7.0, 于4.9×104Pa压力下灭菌20~30min.
⑹ 无氮液体基本培养基:在⑸的配方中除去(NH4)2SO4即可.
⑺ 混合氨基酸和混合维生素的配置:将氨基酸分为七组(如下表),其中六组各有6种氨基酸,每种氨基酸等量研细,充分混匀.若所选的氨基酸为DL型,则用量加倍.第七组只有一中氨基酸.第八组为混合维生素.
Ⅰ 赖氨酸 精氨酸 甲硫氨酸 半胱氨酸 胱氨酸 嘌呤
Ⅱ 组氨酸 精氨酸 苏氨酸 谷氨酸 天冬氨酸 嘧啶
Ⅲ 丙氨酸 甲硫氨酸 苏氨酸 羟脯氨酸 甘氨酸 丝氨酸
Ⅳ 亮氨酸 半胱氨酸 谷氨酸 羟脯氨酸 异亮氨酸 缬氨酸
Ⅴ 苯丙氨酸 胱氨酸 天冬氨酸 甘氨酸 异亮氨酸
Ⅵ 色氨酸 嘌呤 嘧啶 丝氨酸 缬氨酸 酪氨酸
Ⅶ 脯氨酸
Ⅷ 维生素B1 维生素B2 维生素B6 泛酸 对氨基苯甲酸 烟碱酸及生物素
因脯氨酸容易潮解,所以单独列为第七组.
把维生素B1、B2、B6、泛酸、对氨基苯甲酸（BAPA）、烟碱酸及生物素等量研细，充分混匀，配成混合维生素为第八组。
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