摘要:
目的 了解在吲哚美辛诱导的K562细胞凋亡过程中胱天冬酶3，8的表达、活化情况及亚细胞定位；细胞内游离钙离子浓度[f(Ca^2+]i)变化及其机制；并探讨其凋亡调控是否依赖于环氧化酶（COX）的活性抑制。方法 用共聚焦激光扫描显微镜（LSCM）观察在吲哚美辛诱导凋亡过程中K562细胞内半胱天冬酶3，8的变化及亚细胞定位，并用Western blot分析其蛋白质的表达、活化情况；用钙荧光探针结合LSCM检测K562细胞[fCa^2+]i变化，并行钙螯合剂乙二醇四乙酸（EGTA）阻断试验探讨细胞内[fCa^2+]i变化的可能机制；对K562细胞加用COX抑制剂并观察细胞活力变化（MTT试验）。结果 ①半胱天冬酶3，8分子呈散点状分布于胞浆及胞核，在吲哚美辛诱导凋亡过程中其表达水平随吲哚美辛浓度增加而上调，Western blot分析证实其表达上调并被裂解激活。②K562细胞内[fCa^2+]i随吲哚美辛浓度增高而增高；在Ca^2螯合剂EGTA阻断胞外Ca^2+内流的情况下，吲哚美辛仍能诱导细胞内[fCa^2+]i增高及细胞凋亡，但增高的幅度较无EGTA干预明显为低。③低浓度吲哚美辛对K562细胞活力无明显影响，高浓度则明显抑制细胞活力。结论 ①半胱天冬酶3，8的表达上调和裂解激活是吲哚美辛诱导K562细胞凋亡的重要机制；活化的半胱天冬酶3，8呈弥漫性散点状分布于胞浆和胞核。②细胞内[fCa^2+]i增高在吲哚美辛诱导K562细胞凋亡过程中可能起重要作用；胞外钙内流是细胞内[fCa^2+]i增高的主要原因；胞内钙库释放可致[fCa^2+]i浓度增高并能触发细胞凋亡。③吲哚美辛诱导的K562细胞凋亡不依赖于COX活性抑制。
