摘要:
摘要目的：建立一条新的毕赤酵母表达乙肝表面抗原（HepatitisBantigen，HBsAg）柱层析纯化方法，保持HBsAg结构完整性和提高免疫原性。方法：毕赤酵母发酵料液经过菌体破碎、聚乙二醇沉淀、疏水层析、超滤和凝胶分子筛精纯，收集HBsAg合格样品液适当稀释后加入铝佐荆吸附，制成乙肝疫苗半成品免疫BALB／c小鼠。结果：纯化产物经SDS-PAGE银染鉴定得单一条带，分子量在23kD左右，凝胶成像软件分析纯度超过95％；该纯化方法得到的HBsAg颗粒电镜观察得平均直径为22nm病毒样颗粒，结构较均一完整；自制疫苗免疫小鼠后，其血清抗体水平高于葛兰素史克生产的Engerix—B（安在时），存在显著性差异（P〈0．05）。结论：通过该方法纯化的HBsAg结构完整性良好，疫苗免疫效果优于酵母表达的Engerix—B，纯化路径简单高效，易于放大用于工业化生产。
