摘要:
目的寻找高灵敏度、高特异性、检测结果定量、简便易行的梅毒螺旋体抗体酶联免疫检测方法. 方法采用重组技术,在现有已公布的梅毒螺旋体基因组中筛选出公认抗原性最强的三个基因片段Tpp15、Tpp17、Tpp47进行克隆.为了获得水溶性高、特异性强、可标记性好的重组抗原蛋白,有针对性地设计引物以便对表达的梅毒螺旋体膜蛋白进行修饰和改造,同时在收获高效表达的目的蛋白后采取了一系列针对性切割和高特异性纯化.以纯化的重组梅毒螺旋体膜蛋白(r-KTp15,r-KTp17及r-KTp47)为抗原,建立了诊断梅毒螺旋体抗体的双抗原夹心酶联检测方法(DAGS ELISA). 结果在大肠杆菌中获得了重组梅毒螺旋体膜蛋白的高效表达,经修饰纯化之后的目标蛋白水溶性提高,特异性增强,可标记性优于常规不修饰的重组蛋白.应用该三种蛋白为抗原建立的双抗原夹心法血清学诊断试剂盒共检测各期梅毒阳性患者210例,灵敏度达98.6%(207/210),检测正常献血者1 327例,特异性达100.0%(1 327/1 327),优于常规梅毒血清学初筛诊断方法RPR及TRUST法,与TPHA法的符合率为100.0%. 结论以双抗原夹心法酶联免疫诊断试剂盒在梅毒血清学初筛实验室进行梅毒螺旋体抗体的筛查,在灵敏度、特异性方面优于现用的RPR/TRUST法.因此,该方法值得在梅毒血清学初筛实验室推广.
