摘要:
目的分离新生猪肾小管上皮细胞进行体外培养,为研究围生期肾小管上皮细胞生物学行为特征提供理论基础.方法采用机械分散结合Ⅴ型胶原酶(0.5g/L)消化的方法纯化肾小管片段,选择含10%的FCS低糖 DMEM培养基,置于5%CO2,37℃孵箱培养.0.25%胰蛋白酶用于肾小管上皮细胞纯化和传代培养.应用细胞形态学(光镜和电镜)、免疫细胞化学(PanCK和CK18单抗)和酶组织化学(酸性磷酸酶和碱性磷酸酶)方法进行肾近曲小管上皮细胞鉴定;用流式细胞术做细胞纯度鉴定.结果出生12～24小时的新生猪肾小球直径为50～70μm,出生 5～6天的肾小球直径为70～98μm .新生猪肾近曲小管上皮细胞体外培养对葡萄糖的需求量不高.培养成功并传 6～8代,肾小管上皮细胞纯度达95%～98%.综合形态学、免疫细胞化学和酶组织化学结果,支持细胞来源于肾单位的近曲小管.结论采用机械分散-酶消化纯化肾小管,0.25%胰蛋白酶纯化肾小管上皮细胞及低糖 DMEM培养新生猪肾近曲小管的方法是可行的.
