摘要:
基于紫花苜蓿（Medicago sativa L.）盐胁迫抑制消减杂交文库中的一条EST序列,使用RACE技术克隆得到一条1678bp的cDNA序列。核酸序列分析表明该cDNA序列包含一个1281bp的最大开放阅读框,编码426个氨基酸,与拟南芥（Arabidopsis thaliana）RNA解旋酶RH15和RH56的氨基酸序列相似性在90%以上,将该基因命名为MsRH（GenBank序列号：JX508648）。对此基因编码蛋白进行结构域预测表明其含有明显的DEXDc和HELICc结构域,预测其为DExD/H box RNA解旋酶。洋葱（Allium cepa）表皮细胞亚细胞定位分析表明MsRH定位于细胞核。为进一步研究此基因的功能,构建了MsRH基因的超表达载体pBI-MsRH,使用农杆菌介导法转化烟草（Nicotiana tobacum）,筛选得到5株具有卡那霉素抗性再生烟草植株。PCR和RT-PCR检测结果表明MsRH基因成功插入烟草基因组中并表达。使用250mM NaCl处理7d后,转基因烟草中脯氨酸含量低于野生型烟草,而丙二醛和相对电导率则高于野生型烟草。初步试验结果表明转MsRH基因烟草对盐敏感性升高。
