摘要:
目的观察靶向缺氧诱导因子(HIF)-1α的短发夹状小干扰RNA基因转染对骨肉瘤生长的影响.方法针对HIF-1α构建短发夹状siRNA真核表达载体(pSilencer)-HIF并转染骨肉瘤细胞系(SaOS)-2 .骨肉瘤细胞置于缺氧诱导培养基中培养.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹沉淀观察HIF-1α的基因沉默效果.四甲基偶氮唑盐(MTT)比色分析检测细胞体外增殖活力,透射电镜,原位末端标记TUNEL法,Annexin V/PI双标记法检测细胞的凋亡.同时,通过裸鼠移植瘤模型观察HIF-1α基因沉默后对骨肉瘤体内治疗效果.结果测序证实成功构建HIF-1α的短发夹状siRNA真核表达载体pSilencer-HIF,转染骨肉瘤细胞后,HIF-1α基因表达显著抑制(90%).与对照组比较,pSilencer-HIF转染组骨肉瘤细胞缺氧状态下的增殖活性显著降低.缺氧培养72 h后,透射电镜、TUNEL法显示细胞典型凋亡特征,Annexin V/PI双标检测转染组细胞凋亡率为18.71%±0.98%,明显高于pSilencer-neo空载体转染组和未转染组(P<0.01).裸鼠移植瘤实验显示pSilencer-HIF转染组肿瘤生长减慢,成瘤率下降,肿瘤组织中可见大量坏死组织.结论靶向HIF-1α基因的短发夹状siRNA可以有效阻断骨肉瘤缺氧耐受转导通路,抑制骨肉瘤细胞的生长.
