摘要:
目的：利用RNAi技术，观察不同siRNA在体外对Machado-Joseph病变异基因表达的抑制作用，为其应用于临床打下基础。方法本研究分为变异型ATXN3组、野生型ATXN3组及空病毒载体组（对照组）。通过设计针对ATXN3变异基因的特异性siRNA，构建重组型慢病毒载体转染HEK293T细胞，采用Real-time PCR及West-ern blot检测ATXN3 mRNA和蛋白的表达水平，从而对siRNA体外抑制Machado-Joseph病变异基因的效果进行评估。结果 Real-time PCR分析表明，在共转染表达人变异型ATXN3基因和siRNA ATXN3 Mut载体的细胞中，变异型ATXN3组中ATXN3 mRNA的表达较对照组明显下降，差异有统计学意义（P〈0.05），而野生型ATXN3组中ATXN3 mRNA的表达较对照组仅轻微下降，差异无统计学意义（P〉0.05）。Western blot结果表明，与对照组比较，变异型ATXN3组ATXN3蛋白表达被siRNA ATXN3 Mut 1-4明显抑制，差异有统计学意义（P〈0.05），野生型ATXN3组中ATXN3蛋白表达仅被siRNA ATXN3 Mut 1-4轻度抑制。结论特异性siRNA可以选择性沉默变异型ATXN3，说明RNAi是Machado-Joseph病治疗的潜在方向。
