摘要:
目的构建稳定沉默SUMO特异性蛋白酶1（SENP1）基因的人Ⅱ型肺泡上皮细胞系HEPApiC。方法构建沉默SENP1基因的LV3-SENP1-RNAi慢病毒载体。将HEPApiC细胞分为实验组、对照组、空载组,实验组感染LV3-SENP1-RNAi,空载组感染空载体,对照组不做特殊处理;感染72 h后观察绿色荧光强度,采用qRT-PCR检测HEPApiC细胞中的SENP1 mRNA,采用Western blotting法检测SENP1蛋白。结果经酶切鉴定及测序分析,成功构建LV3-SENP1-RNAi慢病毒载体质粒,包装后得到高滴度的病毒颗粒。感染LV3-SENP1-RNAi的HEPApiC细胞中GFP表达随时间延长逐渐增强,说明LV3-SENP1-RNAi成功感染HEPApiC细胞。实验组、对照组、空载组细胞中SENP1 mRNA相对表达量分别为0.026、0.050、0.057,SENP1蛋白相对表达量分别为0.161±0.015、0.781±0.046、0.811±0.008;实验组SENP1 mRNA及蛋白相对表达量降低,与对照组及空载组相比,P均〈0.05。结论成功构建了稳定沉默SENP1基因的HEPApiC细胞系。
