摘要:
目的建立胆囊癌肝转移模型并通过模型筛选高转移亚群细胞，为胆囊癌肝转移研究提供良好的实验工具。方法胆囊癌GBC—SD细胞在含10％胎牛血清的RPMI1645体外培养、胰蛋白酶分离、生理盐水制备细胞悬液1×10^7／ml，4—6周龄裸小鼠脾脏接种建立胆囊癌转移模型；从实验动物肝转移灶中分离肿瘤细胞，经过原代、传代培养，同样的方法建立转移模型，进行第二轮和第三轮高转移表型胆囊癌细胞亚群的筛选。光镜下观察转移灶和筛选细胞的形态特征；抽提细胞与实验动物肝组织DNA，PCR扩增三对人类特异的微卫星序列。结果建立了裸小鼠胆囊癌肝脏转移模型，转移灶分布肝实质各处，但以边缘为主。左叶多受侵犯，部分全肝转移。组织学观察转移病灶为腺癌。第一轮、第二轮、第三轮出转移模型在接种后10周、7周、5周形成肉眼转移灶，转移率为60％、70％、90％。从第三轮转移灶中筛选出高转移胆囊癌细胞亚群，命名为GBC—SD／M3。与亲代细胞GBC—SD相比，所筛选的GBC—SD／M3具有相似的形态特征。GBC—SD、GBC—SD／M3在微卫星D14S68、D18S69、D20S199位点扩增产物片段完全相同，荷瘤裸鼠肝脏没有扩增出相应的产物片段。结论本实验成功建立了胆囊癌肝转移模型；从转移模型中筛选出高转移胆囊癌细胞亚群GBC—SD／M3，与亲代细胞GBC—SD相比，形态和遗传背景保留一致性，但具有更高转移能力。
