摘要:
目的克隆和表达日本血吸虫（Schistosoma japonicum）含EF-手型（EF-hand）结构域钙结合蛋白（SjEFCAB）的编码基因,纯化表达产物,鉴定重组蛋白的反应原性,初步评价其用于日本血吸虫病诊断的价值。方法以日本血吸虫虫卵cDNA文库中免疫筛选所获阳性克隆删除环化后的pBluescript-SjEFCAB质粒为模板,扩增SjEFCAB基因,将目的基因片段与原核表达载体pGEX-4T-1连接构建重组质粒pGEX-4T-1-SjEFCAB,转化至大肠埃希菌（Escherichia coli）BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达,用谷胱甘肽-S-转移酶（GST）标签亲和层析法纯化表达产物,蛋白质印迹（Western blotting）分析其反应原性。以SjEFCAB为包被抗原,采用间接ELISA方法检测日本血吸虫病（78份）、华支睾吸虫病（5份）、猪囊尾蚴病（10份）、卫氏并殖吸虫病（6份）和旋毛虫病（9份）患者血清,以及健康人血清（50份）,评价该重组蛋白的免疫学诊断效果。结果构建了重组质粒pGEX-4T-1-SjEFCAB,并在E.coli BL21中高效表达,经亲和层析纯化获得可溶性重组蛋白SjEFCAB。Western blotting分析结果显示,重组蛋白SjEFCAB能被感染兔血清和血吸虫病患者血清所识别,在相对分子质量（Mr）约为8 200处出现条带。间接ELISA检测日本血吸虫病患者血清的敏感性为82.1%（64/78）,特异性为95.0%（76/80）。与华支睾吸虫病患者、猪囊尾蚴病患者和旋毛虫病患者血清的交叉反应分别为1/5、1/10和1/9,与卫氏并殖吸虫病患者血清无交叉反应（0/6）。结论日本血吸虫SjEFCAB重组抗原具有较高的免疫学诊断价值。
