荧光恒温扩增技术检测单纯疱疹病毒Ⅰ型RNA方法的建立

《检验医学》 曹凌峰[1];苏犁云[1];施鹏[2];董妞妞[1];徐锦[1]
摘要:
目的利用荧光恒温扩增技术(SAT)建立一种快速、可靠的单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)检测方法。方法根据Genbank上获取HSV-1开放读码框Us5区域的RNA序列设计扩增引物及优化探针,使用M-MLV反转录酶及T7 RNA多聚酶对HSV-1 RNA进行核酸扩增,同时利用荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪进行实时荧光信号收集和检测。收集儿童病毒性脑炎或疑似患儿样本212份(脑脊液样本150份、血浆样本62份),以巢式PCR+测序为参比方法,对SAT结果进行Kappa一致性分析。结果 SAT检测HSV-1 RNA的灵敏度为100拷贝/μL,采用SAT检测212份临床样本,共检测出18例HSV-1阳性样本,巢式PCR检出16例阳性,经测序证实其中12例为阳性结果。SAT与巢式PCR+测序方法的Kappa值为0.785,其敏感性为100.0%、特异性为97.0%。结论建立的SAT检测脑脊液和血浆中HSV-1 RNA的方法具有敏感性高、特异性强、准确、快速、可靠的优点,适用于临床对单纯疱疹病毒性脑炎早期的快速诊断。
单纯疱疹病毒I型 , 荧光恒温扩增技术 , 单纯疱疹性脑炎 , 特异性 , 敏感性
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